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淺談動物體內轉染試劑的主要特點及操作步驟

2020-12-15      1583
  動物體內轉染試劑通過納米技術合成,通過物理作用與核酸結合,濃縮包裹核酸,從而保護核酸免受免疫系統破壞,同時增強核酸進入細胞核中表達。不含任何動物來源成分,由于處于納米尺度,粒徑小,不易引起免疫反應,不影響動物和器官組織的功能,可以多次在同一動物注射。
  
  于動物體內轉染,可直接轉染RNA到動物體內進行:
  
  1、基因治療的動物體內研究;
  
  2、RNA干擾的動物體內研究;
  
  3、蛋白功能的動物體內研究。
  
  動物體內轉染試劑主要特點:
  
  1、3天可以得到結果,核酸+轉染試劑,注射動物,完成轉染。
  
  2、肝、腎、心、肺,血液系統,神經系統,皮膚…成功應用。
  
  3、可方便、快捷更換不同的小片斷RNA進行動物試驗。
  
  4、方法先進,拋棄病毒,眾多實驗室應用,穩定可靠。
  
  5、比使用病毒節省90%以上費用,時間縮短到3天。
  
  動物體內轉染試劑操作步驟:
  
  1、傳代細胞準備細胞在轉染前24h傳代,待細胞密度達50%~60%滿底時即可進行轉染。加入沉淀前3~4h,用9ml*培養液培養細胞。
  
  2、DNA沉淀液的準備首先將質粒DNA用乙醇沉淀(10~50μg/10cm平板),空氣中晾干沉淀,將DNA沉淀重懸于μL無菌水中,加50μL2.5mol/LCaCl2。
  
  3、用吸管在500μL2×HeBS中逐滴加入DNA-CaCl2溶液,同時用另一吸管吹打溶液,直至DNA-CaCl2溶液滴完,整個過程需緩慢進行,至少需持續1~2min。
  
  4、室溫靜置30min,出現細小顆粒沉淀。
  
  5、將沉淀逐滴均勻加入10cm平板中,輕輕晃動。
  
  6、在標準生長條件下培養細胞4~16h。除去培養液,用5ml1×HeBS洗細胞2次,加入10ml*培養液培養細胞。收集細胞或分入培養皿中選擇培養。
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